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His-tag的由來

組氨酸標簽也稱His-tag，是一種簡單、應用廣泛的純化標簽，具有六個或更多連續(xù)的組氨酸殘基，其可插入目的蛋白的C末端或N末端。一是能構(gòu)成表位利于檢測；二是構(gòu)成的結(jié)構(gòu)特征（結(jié)合配體）利于純化。His標簽我們經(jīng)常會看到，做蛋白親和純化的小伙伴們應該就沒有沒聽過His名號的吧。可是它究竟從何而來呢？一、起源1975年,J.Porath等人的研究論文中，實驗者將金屬螯合親和層析（簡稱MCAC）技術(shù)應用于蛋白分離。研究者首先將金屬離子（如Cu2+、Ni2+等）固定到IDA-衍生的凝膠...

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怎么預防細胞污染？

一、前言經(jīng)常做實驗的小伙伴都知道，從事細胞培養(yǎng)工作時都有可能面臨細胞受到污染的境況。對于細胞的受污染問題，最為緊要的在于防范，因為一旦細胞受到污染，欲挽回已十分艱難，即便成功挽回，細胞的狀態(tài)亦會受損，進而對實驗結(jié)果造成影響。因此，讓我們首先探討一下如何有效地進行預防。生物安全柜是細胞處理的主要場所，而培養(yǎng)箱是細胞生長的主要場所，所以細胞污染通常就發(fā)生在這兩個地方。那么在使用生物安全柜和培養(yǎng)箱時如何做好預防措施呢？二、措施1.所有進入安全柜的東西都要盡可能保證無菌如果實驗室條件...

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Millipore超濾離心管操作步驟

一、Millipore密理博超濾離心管0.5ml簡介Millipore密理博超濾離心管0.5ml，即Amicon@Ultra-0.5超濾離心管，具有快速超濾功能，能夠達到較高的濃縮倍數(shù)，輕松實現(xiàn)從稀釋和復雜的混和樣本中濃縮回收目的產(chǎn)物。垂直設計的超濾膜以及較大的有效濾膜表面積有助于快速的樣本處理，獲得較高的樣本回收率(通常90%),并達到30倍的濃縮。根據(jù)標稱分子量限值(NMWL)的不同，典型處理時間為10-30分鐘。超濾膜的垂直設計也降低了溶質(zhì)極化造成的濾膜結(jié)垢；過濾管的死...

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一文了解WB-BCA法

一、BCA法的原理BCA法又被稱為Smith法，是由Pierce公司的PaulK.Smith等人在1985年對Lowry法進行改進，提出用BCA代替Folin-酚試劑而建立的（Smith,P.K.,etal.Measurementofproteinusingbicinchoninicacid.AnalBiochem.1985,150:76-85.）。該方法的原理是，在堿性條件下，蛋白質(zhì)中的肽鍵與Cu2+絡合，同時將Cu2+還原為Cu+，BCA螯合Cu+形成紫色絡合物，測定56...

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ELISA檢測方法

ELISA檢測方法一、elisa直接法直接ELISA法是將抗原固定在96孔板上，然后用酶標抗體直檢測抗原。直接ELISA實驗步驟少，檢測速度快，不需要用到二抗，避免了交叉反應，測定結(jié)果不容易出錯。但是由于直接ELISA的抗原通過吸附而不是特異性固定的，樣本中的所有蛋白質(zhì)(靶蛋白及其他雜質(zhì)蛋白)都會固定在96孔板上，導致背景比較高。而且直接ELISA每種靶蛋白都需要標記與其特異性結(jié)合的一抗，實驗顯得不太靈活。另外由于沒有使用二抗，沒有放大作用，降低了測定的靈敏度。優(yōu)點：實驗步驟...

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